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Taq 酶 |
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| Cat. No. |
P06011 250U |
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P06012 1000U |
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| 产品说明 |
本公司生产的Taq DNA 聚合酶是从克隆有重组Thermus aquaticus DNA Polymerase基因的大肠杆菌经诱导表达后，经柱层析纯化获得的超纯高效率耐热DNA聚合酶，其分子量为94KD。Taq DNA Polymerase 具有5’→3’DNA聚合酶活性和5’→3’外切酶活性，无3’→5’外切酶活性。在PCR反应中，Taq DNA Polymerase延伸速度为1-2kb/分钟，能在PCR产物的3’端添加单个dA。 |
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| 活性定义 |
1单位Taq定义为在74 ℃ 30分钟内将10 nmol的dNTPs 掺入到酸性不溶物质 (acid-perceptible material / acid insoluble material)中所需Taq的量。 |
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| 应 用 |
一般用于DNA片段的PCR扩增、DNA标记、引物延伸、序列测定、平末端加A等。产物可以直接用于T/A载体克隆。 |
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| 贮存条件 |
-20℃保存贮存 |
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| 质量控制 |
SDS-PAGE检测纯度大于95%；经过检测无外源核酸酶活性；PCR法检测无外源DNA; 能从50ng lambda 模板中特异性扩增出1kb 和2.2kb 的单拷贝基因。 |
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| 缓 冲 液 |
10×PCR Buffer (Mg2+ Plus): 100mM KCl, 200mM Tris-HCl (pH8.8), 160mM (NH4)2SO4, 20mM MgSO4, 1% TritonX-100,1mg/ml BSA |
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| 浓 度 |
5 U/ ul |
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| 应 用 例 |
注意：以下举列为常规PCR反应系统，仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异，需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物长短等具体情况，设定最佳反应条件。
以lambda DNA为模板，扩增1kb的片段
1、PCR反应体系的建立，50ul反应体系如下（可根据比例放大或缩小体系）：
Template <1ug
Primer1(10pM/ul) 0.5ul
Primer2(10pM/ul) 0.5ul
10×Taq Buffer 5ul
dNTP Mixture(10mM) 1ul
Taq(5U/ul) 0.5ul
ddH2O 补至50ul体系
2、PCR反应循环的设置：
95℃ 5min;94℃ 30s,62℃ 40s,72℃ 1min, for 25 cycles;72℃ 7min
3、结果检测：反应结束后，取4ul PCR反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。
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| 注意事项 |
除了酶活性丧失外，下列因素也可能导致扩增失败：
(1) 模板太多或太少
(2)样品中存在Mg2+ 络合剂, 导致Mg2+实际浓度过低
(3) PCR仪温度不准
(4) 临床来源的样品中含有未知的Taq酶抑制剂
(5) 引物部分降解
(6) dNTP部分降解
(7) Taq酶用量太大等。 |
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如须更多相关详细信息请咨询。
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